液相色谱流动相使用时的坏习惯先来了解诶下流动相，色谱过程中携带待测组分向前移动的物质称为流动相。与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相。用作流动相的物质有：气体、液体、超临界流体等。常见的流动相主要有：乙腈-水溶液、乙腈-醋酸水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-磷酸水溶液等。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
（1）流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
（2）流动相与样品不产生化学反应
（3）流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
（4）流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用uv检测器， 好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
（5）流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
（6）在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
在流动相使用过程中有些所不为的习惯
1加入有机相之后再测量流动相的ph值
通常情况下测量流动相的ph值，是测量水相中的ph值参数。有机相加入之后ph值参数的测量就和之前有误差。
ps：但如果能保证每次测量都是加入相同量的有机相之后得到的ph值，虽然这不能保证精确度，但是这能保证前后一致的测量结果，所以这样也没有问题。
2没有进行流动相的过滤、流动相的脱气。
配制好的流动相在使用前一定要先用0.5um孔径的微孔滤膜来过滤。这是因为溶液中含有很多肉眼难以发现的微小颗粒，如果不把它们滤除掉，就会堵塞泵口、柱头上的过滤器，这样就堵塞了流动相的正常通道，使色谱柱的阻力增加，柱压升高，柱效下降。
碰到这种情况时，要换用经过滤的流动相，并将堵塞的滤器拆下来浸泡在20%的硝酸水溶液中以超声波清洗机清洗20分钟，以除去滤片上的堵塞物。
流动相在使用前必须脱气，以尽可能的除去溶解在流动相中的气体，否则，这些气体会使柱填料的性能降低，还能够对检测器的信号产生很大的干扰。脱气有多种方法，如超声脱气、真空脱气、氮气脱气等。真空脱气法和氮气流脱气法是目前最常用的脱气法。水和甲醇混合后会产生大量的气泡，如果不脱气就使用，气泡就会进入色谱柱和检测器，并将影响分析工作的正常进行。
3不使用缓冲盐、没有在正确的缓冲区间使用缓冲盐
缓冲盐的加入是用来控制和修正流动相中ph值的改变的。
样品基质、空气中的co2、水中的杂质都会造成流动相ph值的改变，而ph值的改变会影响样品的保留、峰形、峰面积参数。每个缓冲盐都有一定的缓冲范围，在此范围内它提供了 佳的ph稳定性。在这个范围外，缓冲盐在抵抗ph值变化方面是无效的。
所以要么在正确的范围内使用缓冲盐，要么选择一个缓冲范围覆盖所需ph值的缓冲盐。
4向有机相中加入缓冲盐
如果将水相的缓冲溶液加入到有机相中，会大大增加缓冲盐析出的风险。
缓冲盐的析出在初期可能并不明显，但会对仪器的各个部件都会产生一定影响。
5梯度洗脱时直接用泵去混合流动相并且流动相比例从0 开始
现在的液相色谱能够非常高效的进行在线脱气和流动相混合。但是将梯度洗脱比例从0 开始，会有比较大的出现气泡和沉淀的风险。
6没有使用正确的ph值修饰酸或碱作为缓冲液
缓冲溶液的修饰酸或碱，只使用生成缓冲盐的酸或碱。例如，磷酸钠缓冲液只能用磷酸或氢氧化钠调节。
7没有在方法中说明缓冲液的全部信息
例如只在方法中写“称5克磷酸钠溶入1000毫升水”。
缓冲盐的类型决定其ph缓冲范围，而缓冲盐中所需物质的浓度决定了缓冲强度。例如：5g的无水磷酸钠和5g的一水磷酸钠具有不同的缓冲强度，会影响保留率。
8使用仪器时不调查之前使用的流动相情况，直接用纯有机溶剂冲系统
如果之前的方法在b通道使用缓冲溶液，而这次没有经过调查就直接在b通道使用了纯的有机溶剂，那么就会造成该通道缓冲盐析出、出现堵塞等风险。
9将溶剂瓶中的流动相用干为止
溶剂瓶中的流动相如果用干，未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，会导致仪器中出现气泡等问题。
10色谱柱变干
忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1ml/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。

---

谱质分析检测技术（上海）有限公司